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Título: Diversidade e produção de antimicrobianos dos fungos decompositores de madeira submersa em lagos da região do baixo rio Tapajós – Pará.
Autor: Canto, Eveleise
Orientador: Souza, João
Palavras-chave: Diversidade
Antimicrobiano
Fungos
Amazônia
Data do documento: 2-Jun-2020
Programa: Bionorte
Abstract: Aquatic ecosystems harbor a large species diversity with biotechnological potential, such as wood-decomposing fungi submerged in rivers in Amazon region, which need to be discovered. The general objective of this work was to investigate the diversity and production of antimicrobials from submerged wood decomposing fungi in aquatic environments in Santarém-Pará. This thesis contains 3 chapters: The first chapter contains information the composition and diversity of submerged wood decomposing fungi in two lakes in the state of Pará; The second chapter contains information the evaluation of the production of antimicrobials by decomposing fungi of submerged wood in lakes in the Brazilian Amazon; The third chapter has an evaluation of the chemical composition of the Fusarium C12 extract with antimicrobial activity. The methodology was carried out, in the study of diversity (chapter one), collections of decomposing wood were made from the Juá and Maicá Lakes (Santarém-Pará), and were identified by direct examination of the wood and by culture followed by genetic sequencing of fungal taxa present in these samples. The evaluation of antimicrobials production by cultivable fungi (chapter two), bioprocesses were carried out and the filtrates of the cultures were subjected to fractionation and bioassays to evaluate the antimicrobial activity against E. coli and S. aureus. To investigate the chemical composition of Fusarium solani LM6281 isolate (chapter three), chemical fractionation procedures and chromatographic, spectrometric analyzes were performed. Regarding the results obtained, it was observed that: Chapter I - In view of the sampling performed, the taxa were identified in Lake Juá (10 sexual and 13 asexual, most frequent taxon Xylomyces giganteus) and Lake Maicá (17 sexual and 9 asexual, taxon most frequent Thielavia sp.). In Lake Juá and Maicá, the diversity indexes were H ': 2.6514 and H': 2.8174, respectively, and the Sørensen index between these lakes was only 0.3673 .; Chapter II - The culture filtrates of the Fluviatispora C34, Morosphaeriaceae C18, Monodictys C15 and Fusarium C12 isolates presented antibacterial and specifically the culture filtrate of the Fusarium C12 isolate stood out with a 50 μg / mL MIC against the S. aureus strains; and Chapter III- Fusarium C12 was identified as Fusarium solani LM6281 and the preliminary CCD assays of crude ethyl acetate extract from the cultivation of F. solani LM6281 suggested the presence of terpenes, quinones, phenolics and flavonoids and the NMR spectra of 1H suggested the presence of metabolites such as flavonoids and chalcones. The fractionation of the organic acetate fraction by open column chromatography resulting in 112 fractions that were analyzed by CCD. The analysis by CCD produced information that allowed to select 30 fractions with major components and that could be joined in 4 fractions with similar/similar chromatographic profiles. Bioautography demonstrated that all 4 fractions obtained showed antibacterial activity and allowed the identification of the RF of the active fractions against S. aureus.
Resumo: Os ecossistemas aquáticos são locais que abrigam diversidade de espécies com potencial biotecnológico como os fungos decompositores de madeira submersa em água de rios da região amazônica, as quais precisam ser desvendadas. O objetivo geral da presente tese foi investigar a diversidade e produção de antimicrobianos de fungos decompositores de madeira submersa em ambientes aquáticos em Santarém-Pará. A presente tese contêm 3 capítulos: O primeiro capítulo possui as informações quanto a composição e a diversidade de fungos decompositores de madeira submersa em dois lagos do estado do Pará; O segundo capítulo possui a informações sobre a avaliação da produção de antimicrobianos por fungos decompositores de madeira submersa em lagos da Amazônia brasileira; O terceiro capítulo possui avaliação da composição química do extrato de Fusarium C12 com atividade antimicrobiana. Quanto a metodologia realizada, no estudo da diversidade (capítulo um), foram realizadas coletas de madeira em decomposição dos Lagos Juá e Maicá (Santarém-Pará), foram identificados por exame direto da madeira e por cultura seguida de sequenciamento genético os táxons dos fungos presentes nessas amostras. Para o estudo de avaliação de produção de antimicrobianos pelos fungos cultiváveis (capítulo dois), foram realizados bioprocessos e os filtrados das culturas foram submetidos a fracionamento e bioensaios para avaliar a atividade antimicrobianas frente a E. coli e S. aureus. Para investigar a composição química do extrato do isolado Fusarium solani LM6281 (capítulo três) foram realizados procedimentos de fracionamento químico e análises cromatográficas, espectrométricas. Quanto aos resultados obtidos observou-se que: Capítulo I - Frente a amostragem realizada, foram identificados os táxons no lago Juá (10 sexuais e 13 assexuais, táxon mais frequente Xylomyces giganteus) e do lago do Maicá (17 sexuais e 9 assexuais, táxon mais frequente Thielavia sp.). No lago Juá e Maicá os índices de diversidade foram respectivamente H ': 2.6514 e H': 2.8174 e o índice de Sørensen entre esses lagos foi de somente 0.3673.; Capítulo II - Os filtrados de cultura dos isolados Fluviatispora C34, Morosphaeriaceae C18, Monodictys C15 e Fusarium C12 apresentaram antibacteriana e especificamente o filtrado de cultura do isolado Fusarium C12 destacou-se apresentando CIM de 50 μg/mL frente as cepas S. aureus; e Capítulo III- Fusarium C12 foi identificado como Fusarium solani LM6281 e os ensaios preliminares de CCD de extrato bruto de acetato de etila do cultivo de F. solani LM6281 sugeriram a presença de terpenos, quinonas, fenólicos e de flavonoides e os espectros de RMN de 1H sugeriram a presença de metabólitos como flavonoides e chalconas. O fracionamento da fração orgânica de acetato por cromatografia de coluna aberta resultando em 112 frações que foram analisadas por CCD. A análise por CCD produziu informação que permitiu selecionar 30 frações com componentes majoritários e que puderam ser unidas em 4 frações com perfis cromatográficos semelhantes/similares. A bioautografia demonstrou que todas as 4 frações obtidas apresentaram atividade antibacteriana e permitiu a identificação do Rf das frações ativas frente a S. aureus.
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