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Título: Anotação do transcriptoma parcial de Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926
Autor: Azevedo Junior, Gilson Martins de
Orientador: Rafael, Míriam Silva
Coorientador: Vicentini, Renato
Palavras-chave: Anopheles darlingi
DNA
Evolução
Data do documento: 17-Mai-2011
Editor: Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia - INPA
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva - GCBEv
Abstract: Disease-transmitting insects have been studied to characterize several biological and evolutionary aspects. Whole Genome sequencing has been allowing comparisons between the gene sequences of different species, providing molecular data. The mosquitoes Anopheles gambiae (subfamily Anophelinae), the most important vector of malaria in Africa, whose genome contains 278.253.050 base pairs (bp), Aedes aegypti, transmitter of Dengue, with 1.310.090.344 bp and Culex quinquefasciatus, vector of arbovirus, with 579.042.118 bp, both of (subfamily Culicinae) are cited. In Brazil, the Anopheles darlingi (subfamily Anophelinae) is the most important malaria vector, whose partial EST (Expressed Sequences Tags) libraries of adults and larvae previously obtained were analyzed in this study. Genic sequences of An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus were analyzed for the presence of orthologous genes, in these mosquitoes in comparison with An. darling. An. darlingi’s ESTs (568 Unigenes) were virtually mapped in An. gambiae’s chromosomes. After that, differential gene expressions were analyzed, which allowed to statistically quantify the levels of differential expression of each gene, in the transcriptome of An. darlingi. The An. darlingi sequences were mapped according to onthologic terms of Gene Ontology (GO) and the sequences differentially expressed, with good statistical value that indicates the orthology were manually analyzed, according to the literature.The studies showed that 61% of An. darlingi are orthologous in An. gambiae and the in silico chromosomal mapping showed that the An. darling’s 568 Unigenes are represented in 793 chromosomal regions of An. gambiae, corroborating with evolutionary studies that say that the two species are evolutionarily close. An. darlingi sequences mapped in GO were associated with 1249 ontholgy levels and sublevels that describe a gene according to its function and cellular location. Differential expression analysis of some gene products was found more intense in larvae than in An. darlingi adults. Phylogenetic analysis of the An. darlingi glutathione-s-transferase (GST) gene was also done, an insecticide resistance gene which is well conserved, evolutionarily speaking, in An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus. The Phylogenetic tree grouped An. darlingi and An. gambiae as sister species, because they are more evolutionarily related than Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus. In this analyses, the Phlebotomus papatasi was used as an external group, as the root of the tree. The manual annotation of An. darlingi ESTs sequences helped to understand the gene expression and evolutionary aspects of this mosquito related with An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus, and also provided important data for further studies about individual genes of this malaria-transmitting species in Brazil.
Resumo: Insetos transmissores de doenças têm sido estudados para caracterização de diversos aspectos biológicos e evolutivos. Sequenciamentos de genomas inteiros têm permitido comparações entre sequências gênicas de espécies diferentes, fornecendo dados moleculares. Citam-se os mosquitos Anopheles gambiae (subfamília Anophelinae), principal vetor da malária na África, cujo genoma contém 278.253.050 pares de bases (pb), o Aedes aegypti, transmissor do Dengue, com 1.310.090.344 pb e Culex quinquefasciatus, vetor de arboviroses, com 579.042.118 pb, ambos da (subfamília Culicinae). No Brasil, o Anopheles darlingi (subfamília Anophelinae) é o principal vetor da malária, cuja bibliotecas de ESTs (Expressed SequenceTags) parcial de adultos e larvas previamente obtidas foram analisadas no presente trabalho. Sequências gênicas de An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus foram analisadas quanto a presença de genes em comum e genes ortólogos, nesses mosquitos em comparação com An. darlingi. ESTs (568 Unigenes) de An. darlingi foram mapeadas virtualmente em cromossômos de An. gambiae. Em seguida, foram realizadas análises de expressão diferencial gênica, o que permitiu quantificar estatisticamente os níveis de expressão de cada gene, no transcriptoma de An. darlingi. As sequências de An. darlingi foram mapeadas nos termos ontológicos do Gene Ontology (GO) e as sequências diferencialmente expressas, com bons valores estatísticos que indicam ortologia, foram analisadas manualmente, segundo a literatura. Os resultados mostraram que, 61% das sequências de An. darlingi são ortólogas em An. gambiae e o mapeamento cromossômico in silico mostrou que os 568 Unigenes de An. darlingi estão representados em 793 regiões cromossômicas do An. gambiae, corroborando estudos evolutivos de que as duas espécies são próximas evolutivamente. As sequências de An. darlingi analisadas no programa GO foram associadas a 1.249 níveis e subníveis de ontologias que descrevem um gene de acordo com sua função e localização celular. Análises de expressão diferencial de alguns produtos gênicos mostraram-se mais intensas em larvas do que em adultos de An. darlingi. Realizaram-se, ainda, a análise filogenética do gene da Glutationa-S-Transferase (GST) de An. darlingi, um gene de resistência a inseticidas bem conservado em termos evolutivos em An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. A árvore filogenética agrupou o gene da GST de An. darlingi com An. gambiae como espécies irmãs, estando estas proximamente relacionadas evolutivamente do que em relação ao Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. O Phlebotomus papatasi, constou como grupo externo, para enraizamento dessa árvore. A anotação manual de ESTs de An. darlingi auxiliou na compreensão da expressão gênica e aspectos evolutivos desse mosquito em relação ao An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus, além de fornecer dados importantes para estudos posteriores sobre funções gênicas individuais de An. darlingi transmissor da malária no Brasil.
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