Dissertação
Análise citogenética e genotóxica de Caiman crocodilus (Linnaeus, 1758) provenientes de ambiente natural e antropizado dos arredores de Manaus
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Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia - INPA
Resumo
Os crocodilianos são predadores de topo de cadeia e possuem um importante
papel nos ecossistemas em que estão inseridos. Das espécies que ocorrem no
Brasil, a mais abundante é o jacaretinga (Caiman crocodilus). Os jacarés da
região amazônica são os menos estudados em relação às outras espécies de
crocodilianos, onde os poucos estudos realizados estão circunscritos a áreas
protegidas, excluindo as populações de C. crocodilus ocorrentes no perímetro
urbano, que estão continuamente expostas a ambientes antropizados. Em termos
citogenéticos foi descrito o número diploide da espécie, porém uma abordagem
mais específica sobre bandeamentos cromossômicos diferenciais, hibridização
fluorescente in situ (FISH), teste de micronúcleo e ensaio do cometa se fazem
necessários para um melhor entendimento do efeito da poluição no genoma
desses animais. Exemplares oriundos de ambiente natural e antropizado de
Manaus, AM foram estudados para avaliar o potencial genotóxico dos poluentes
domésticos no genoma de C. crocodilus. Para as análises cromossômicas foram
utilizados 12 exemplares de C. crocodilus (6 ♂, 6 ♀), do Lago Catalão – Manaus,
Igarapé do Mindu e Igarapé da Assua, Estado do Amazonas. A espécie
apresentou número diploide de 42 cromossomos (24t+18m/sm e NF=60) com
pouca complexidade e heteromorfismo. O padrão de distribuição da
heterocromatina mostrou-se conservado, nas regiões centroméricas dos
cromossomos, porém mais acentuado no par 21. A região organizadora de
nucléolo (Ag-RON) é simples, cuja localização no par 13 coincidiu com a região
heterocromática centromérica, e com a localização de sítios de hibridação
duplicados com sonda de DNAr 18S no par 13 de C. crocodilus. Estes resultados
sugeriram a possibilidade de variação para a espécie, entre os exemplares da
América do Sul em relação aos da América do Norte, diferenciada através de
fissões cromossômicas, rearranjo comum a outras espécies do gênero. A análise
genotóxica, por Ensaio do Cometa, de 8 exemplares de C. crocodilus (4 ♀, 4 ♂),
do Lago Catalão e 7 (2 ♀, 1 ♂ e 4 indeterminados) dos igarapés urbanos de
Manaus – AM. Foi realizado por meio do teste U de Mann-Whitney. Observaramse
que, o valor de “p” foi significativo para os níveis 3 (p = 0,007) e 5 (p = 0,010),
ao comparar os diferentes ambientes, onde o nível 3 é considerado um dano
moderado e o nível 5 que a célula se encontra em apoptose. Já para o teste do
Micronúcleo, entre os 15 exemplares de C. crocodilus (7 ♀, 8 ♂), Lago Catalão e
15 (8 ♀, 9 ♂) do igarapé do Mindu. Nota-se que ao comparar a quantidade de
eritrócitos micronucleados encontrados com o ambiente, o valor de p = 0,04 se
mostrou significativo. O impacto da poluição no ambiente aquático pode ser
significativo a longo prazo para o surgimento de mutações e diferenciação no
cariótipo das espécies que ocorrem na região amazônica. Nossos resultados
podem contribuir significativamente com estratégias de conservação dos
crocodilianos no perímetro urbano da cidade de Manaus.
Abstract:
Crocodilians are chain top predators and play an important role in the ecosystems
in which they live. Species that occur in Brazil, the most abundant is the
spectacled Caiman (Caiman crocodilus), which is found in many different
environments. Alligators in the Amazon region are the least studied in relation to
other species, occurring in other parts of the world where the few studies are
confined to protected areas, excluding the populations of C. crocodilus occurring
within the city limits, which are continuously exposed the anthropogenic
environments, generating an incipient knowledge about them. Although there is
description for the diploid number of the species, a more specific approach as
banding chromosome techniques, fluorescent in situ hybridization (FISH),
micronucleus test and comet assay are necessary for a better understanding of
pollution effect in the genome of these animals. Thus, we collected specimens in
non anthropic environment and anthropic for domestic effluents to assess the
genotoxic potential of these pollutants in the genome of alligators. For
chromosomal analyzes were used 12 Caiman crocodilus (6 ♂, ♀ 6), caughts in
Lake Catalão, in the Mindu stream and the Assua stream in the Amazon state.
Where, from the conventional staining subspecies showed diploid number of 42
chromosomes (24t+18m/sm and NF=60) with little complexity and
heteromorphisms. The pattern observed in C. crocodilus in relation to the
distribution of heterochromatin is shown maintained, presenting in the centromeric
regions of chromosomes, but more so in pair 21. The nucleolus organizer region
(Ag-RON) is simple, where your location the pair 13 coincides with the
heterochromatic centromeric region, and with the location of hybridization sites
with 18S rDNA probe. These hybridization sites showed a doubling in one of the
pair of chromosomes 13 in C. crocodilus. Cytogenetic characteristics suggested
the possibility of variation for the species in relation to North America,
differentiated by chromosomal fissions, common rearrangement to other species
of the genus. For genotoxic analysis of Comet Assay were captured 8 C.
crocodilus (4 ♀, 4 ♂) Lake Catalan and 7 (2 ♀, 1 ♂ and 4 indeterminate) of urban
streams of Manaus - AM. Using the Mann-Whitney U test, it was observed that the
p value was significant for levels 3 (p=0.007) and 5 (p=0.010) when comparing the
different environments, where the level 3 is considered damage moderate, and
level 5 that the cell is undergoing apoptosis. As for the micronucleus test, 15 C.
crocodilus were captured (7 ♀, 8 ♂) on Lake Catalão and 15 (8 ♀, 9 ♂) of Mindu
stream - AM. Note that when comparing the amount of micronuclei with the size of
the animals, the value of p=0.04 was significant. Our study demonstrates that the
impact of pollution on the aquatic environment can be significant in the long term
for the emergence of mutations and differentiation in the karyotype of the species
occurring in the Amazon. Our results can significantly contribute to the crocodilian
conservation strategies within the city limits of the city of Manaus.
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