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Título: Análise das relações entre espécies do grupo Quadrifidum, subgênero Simulium (Psaroniocompsa) (Diptera, Simuliidae) utilizando o gene Citocromo Oxidase I
Autor: Mendonça, Alessandra Cunegondes de
Orientador: Hamada, Neusa
Coorientador: Kaminski, Ana Claudia
Palavras-chave: Simuliidae neotropicais
Gene mitocondrial
Neighbour Joining (método)
Taxonomia
Data do documento: 13-Jan-2010
Editor: Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia - INPA
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva - GCBEv
Abstract: Taxonomic knowledge of Simuliidae (Diptera) in the Neotropical region has advanced. In Brazil, where three genera have been recorded, most of the species are in the genus Simulium and are distributed among eight subgenera. In spite of the above-mentioned taxonomic advance, molecular tools have rarely been used in studying these organisms. The sequencing of gene fragments permits direct evaluation of DNA polymorphisms, providing information needed to make relationship inferences among species. The DNA barcoding method is a species-identification method based on the diversity of a portion of the sequence of the Cytochrome oxydase I (COI) gene subunit. Sequencing this mitochondrial gene represents a promising method for diagnostic studies of biological diversity, helping to delimit cryptic species. The objective of this study is to characterize genetically the Quadrifidum species group, in the S. (Psaroniocompsa) subgenus, using barcoding of a fragment of the COI gene and also, to verify the utility of this gene for identifying species in this species group and other related species in the same subgenus. The analyzed specimens were collected in the field, preserved in 100% ethanol and maintained refrigerated until the molecular analysis. Total DNA was isolated, the COI gene sequences were amplified by the Polymerase Chain Reaction (PCR) and later purified; the sequencing was done using a MegaBace 1000. The sequences obtained were compared based on the species distance computed using the Kimura-2-Parameters model (K2P), and the phylogenetic tree was created based on these distances. The result of this analysis does not corroborate the monophyly of the Quadrifidum species group; species allocated in this group were positioned in other groups in the subgenus S. (Psaroniocompsa). In general, the analyzed specimens were grouped together, indicating the utility of this technique for identifying species in the subgenus S. (Psaroniocompsa).
Resumo: Os conhecimentos taxonômicos sobre Simuliidae (Diptera) na região Neotropical têm avançado significativamente nos últimos anos. No Brasil, onde três gêneros foram registrados, a maioria das espécies se encontra no gênero Simulium, distribuídas em oito subgêneros. Apesar do avanço taxonômico, ferramentas moleculares ainda são pouco utilizadas em estudos sobre esses organismos. O seqüenciamento de fragmentos de genes permite a avaliação direta de polimorfismos de DNA, fornecendo dados para realizar inferências sobre as relações entre espécies. O método de DNA barcoding , sistema de identificação baseado na diversidade de uma parte da seqüência da subunidade I citocromo oxidase (COI), representa um método promissor para o diagnóstico da diversidade biológica facilitando a delimitação de espécies crípticas. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi caracterizar geneticamente o grupo de espécies Quadrifidum, do subgênero S. (Psaroniocompsa) utilizando um fragmento do gene COI e também, verificar se esse gene é útil para identificar espécies pertencentes ao subgênero S. (Psaroniocompsa), incluídas no presente estudo. Os espécimes foram coletados no campo, preservados em álcool 100% e mantidos refrigerados até a análise molecular. O DNA total foi isolado, as seqüências do gene COI foram amplificadas por Polymerase Chain Reaction (PCR) e posteriormente purificadas; o seqüenciamento foi feito em seqüenciador MegaBace 1000. As seqüências obtidas foram comparadas quanto à distância entre espécies com o modelo Kimura-2-Parâmetros (K2P). A partir destas distâncias foi gerada uma árvore filogenética. Os resultados do presente estudo não corroboram a monofilia do grupo Quadrifidum, uma vez que algumas de suas espécies foram agrupadas a espécies pertencentes a outros grupos de espécies do subgênero S. (Psaroniocompsa). No geral, as espécies analisadas foram posicionadas num mesmo grupo, indicando que essa técnica é útil para identificar espécies desse subgênero.
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