Dissertação
Caracterização molecular e análise filogenética dos vírus dengue circulantes na cidade de Boa Vista, Roraima , Brasil
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Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia - INPA
Resumo
Vírus Dengue (DENV) são agentes etiológicos da mais importante arbovirose das regiões tropical e
subtropical do planeta. São flavivírus classificados, segundo suas propriedades genéticas e
antigênicas, em quatro tipos virais: DENV1, DENV2, DENV3 e DENV4. Nas últimas décadas, o
dengue tem aumentado sua virulência e muitos fatores têm sido associados a esse aumento.
Infecção secundária e fatores virais são os principais apontados para aumento da ocorrência das
formas graves do Dengue. Neste estudo foram analisadas 80 amostras de soros de pacientes com
suspeita de infecção pelos vírus dengue, provenientes da cidade de Boa Vista, com intuito de
identificar os sorotipos e genótipos circulantes. Oitenta amostras foram inoculadas em células
C6/36 de Aedes albopictus. O RNA foi extraído e a identificação do tipo viral foi realizada por
transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) desenvolvida por
Lanciotti et al. (1992). Após identificar o tipo viral, o cDNA viral foi submetido à PCR com
primers específicos para o gene E. O seqüenciamento das amostras foi realizado na plataforma
MEGABACE1000. A reconstrução filogenética foi realizada no programa PhyML 3.0 utilizando o
método de Máxima Verossimilhança. A confiabilidade dos ramos foi calculada pelo Teste de Razão
de Verossimilhança (aLRT).Do total, 34 amostras foram isoladas e identificadas. Foram 23 cepas de
DENV1 e 11 DENV2, sendo 03 casos de co-infecção. Após o seqüenciamento e edição das
seqüências, foram obtidos 15 fragmentos de 962nt para DENV1 e 03 fragmentos de 825nt para
DENV2. As cepas de DENV1 isoladas neste trabalho formaram clado com o genótipo V, junto com
cepas da Venezuela, Brasil, previamente descritas. As cepas de DENV2 foram classificadas como
genótipo “Americano/Asiático”, formando um clado com as cepas isoladas de Cuba e de Taiwan.
Os dados demonstram uma forte relação entre as cepas isoladas em Roraima e cepas isoladas no
Caribe e Venezuela. Os resultados obtidos abrem caminho para novas análises da evolução e fluxo
gênico do DENV no Brasil e suas relações com DENV isolados em outras regiões do Continente
Americano.
Abstract:
Dengue virus (DENV) are the etiologic agent of the most important arbovirosis from Tropical and
Subtropical region. They are classified as flaviviruses following their genetic and antigenic
properties into four groups: DENV1, DENV2, DENV3 and DENV4. In the last decades, dengue
fever has increased its virulence and several factors had been associated to this increasing.
Secondary infection and viral factors are the main one implicated to increase of severe form of
dengue fever. In this study, were analysed 80 samples of serum from patients with suspect of
dengue infection from Boa Vista. We aim to identify the DENV serotypes and genotypes circulating
in this city. Eighty samples were inoculated in C6/36 cells. The RNAs were extracted and viral
identity was archieved using by Reverse Transcription – Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)
method developed by Lanciotti et al. (1992). After viral type identification, cDNA was used to PCR
with specific primers to gene E. The sequencing was performed on MEGABACE1000 platform.
Maximum Likelihood dendrograms were constructed by PhyML 3.0. Branch confidences were
calculated using approximated Likelihood Ratio Test (aLRT). Thirty four samples were isolated and
identified: 23 DENV1 strains and 11 DENV2 strains, three of them were coinfection. After edition
of sequences, 15 fragments with 962nt large of DENV1 and three fragments with 825nt large of
DENV2 were used to analysis. DENV1 strains isolated in this study grouped with strains of
genotype V, together with strains from Venezuela and Brazil, previously described. DENV2 strains
were classified as american/asian genotype, together to Cuba and Taiwan strains. Data obtained
shown strong relantionship between Roraima strains and Venezuelan and Caribbean strains. The
results help future analysis about DENV evolution and gene flow in Brasil and its relationship with
DENV isolated in other regions of American Continent.
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