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Título: Expressão gênica diferencial em Symphysodon aequifasciatus (Pellegrin,1904) exposto ao benzol[a]pireno e ao fenantreno
Autor: Lemgruber, Renato de Souza Pinto
Orientador: Val, Adalberto Luis
Coorientador: Marshall, Nislanha Ana dos Anjos
Palavras-chave: Acará-disco (peixe)
Poluição por petróleo Amazônia
Bioinformática
Data do documento: 3-Jul-2012
Editor: Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia - INPA
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva - GCBEv
Abstract: The Amazon basin is located in the central and eastern part of South America. It is one of the most biodiverse regions on the planet. Over 3,000 fish species have been described for the region so far. Despite its enormous importance, the Amazon fish fauna is threatened by a series of anthropogenic environmental disturbances, such as overfishing, dam building for power generation, and water pollution by different sources of contaminants, among which oil and its derivatives, such as polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). The oil is extracted at the Urucu Oil Province, or Pedro de Moura Operations Base (BOGPM), and transported through pipelines and ships to the Isaac Sabbá refinery (Reman) in Manaus. The aquatic environment is a major destination of pollutants such as PAHs, and fish, organisms that play an important ecological role in the aquatic trophic web, are considered models for environmental studies. This study aims to identify differentially expressed genes in specimens of Symphysodon aequifasciatus exposed to the combination of two PAHs, benzo[a]pyrene (0.5μg/L) and phenanthrene (50μg/L), present in oil, comparing cDNA libraries from the SOLiD sequencer. Two groups, control and treatment, each containing six fish, were exposed to PAHs for 48 h. RNA was extracted from the liver by the Trizol method and the samples were pooled. Then, cDNA libraries were constructed according to the SOLiDTM SAGETM protocol for sequencing in the SOLiD v.3 Plus sequencer, and results were analyzed by bioinformatics. 32,311,242 tags in the control and 62,967,623 tags in the treatment were sequenced, generating 1,140,779 unique tags. From this total, we identified 24.200 genes. Among the selected genes are cyp, gst, and ahr, related to the xenobiotic metabolism. The results indicate that even an acute exposure of 48 h can cause metabolic change in response to environmental xenobiotics. Furthermore, the SOLiD sequencer has shown to be a powerful tool in large-scale sequencing.
Resumo: A bacia amazônica está localizada na parte central e leste da América do Sul, sendo umas das regiões com maior biodiversidade do planeta. A região possui mais de 3000 espécies de peixes já descritas e, apesar de sua enorme importância, a ictiofauna amazônica tem sido ameaçada por uma série de distúrbios ambientais de caráter antrópico, como a sobrepesca, a construção de represas para a geração de energia elétrica e a poluição das águas por diversas fontes de contaminantes, dentre elas o petróleo e seus derivados, como os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs). O petróleo extraído na Província Petrolífera de Urucu ou Base de Operações Geólogo Pedro de Moura (BOGPM) é transportado por meio de dutos e balsas até a refinaria Isaac Sabbá (Reman) em Manaus. O ambiente aquático é um dos principais destinos de poluentes, como os HPAs, e os peixes são organismos que desempenham um importante papel ecológico na teia trófica aquática, e por isso são considerados modelos para estudos ambientais. O presente trabalho tem como objetivo identificar, por meio de comparação de bibliotecas de cDNA a partir da plataforma SOLiD, genes diferencialmente expressos em exemplares de Symphysodon aequifasciatus, expostos à combinação de dois HPAs, benzo[a]pireno (0.5μg/L) e fenantreno (50μg/L), presentes no petróleo. Para isso, dois grupos, controle e tratamento, contendo seis peixes cada, foram expostos aos HPAs por 48h. O RNA foi extraído do fígado pelo método Trizol e realizado um pool das amostras. Em seguida, foi realizada a construção das bibliotecas de acordo com o protocolo do SOLiDTM SAGETM, para sequenciamento na plataforma SOLiD v.3 Plus. Os resultados foram analisados por bioinformática. Foram sequenciadas 32.311.242 tags no controle e 62.967.623 tags no tratamento, gerando 1.140.779 tags únicas diferentes entre si. Deste total, foram identificados 24.200 genes. Dentre os genes selecionados estão os genes cyp, gst e ahr, relacionados ao metabolismo de xenobióticos. Os resultados indicam que mesmo uma exposição aguda, de 48h, provoca alterações metabólicas em resposta aos xenobióticos ambientais. Além disso, a plataforma SOLiD se mostrou uma ferramenta poderosa no sequenciamento em larga escala.
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